Forskrift om endring i forskrift om fastsettelse av metoder for prøvetaking og analyse i forbindelse med offentlig kontroll av fôrvarer (fôranalyseforskriften)

I

I forskrift 28. februar 2020 nr. 702 om fastsettelse av metoder for prøvetaking og analyse i forbindelse med offentlig kontroll av fôrvarer (fôranalyseforskriften) gjøres følgende endringer:

I EØS-henvisningsfeltet skal henvisningen til forordning (EF) nr. 152/2009 lyde:

nr. 31o (forordning (EF) nr. 152/2009 som endret ved forordning (EU) nr. 278/2012, forordning (EU) nr. 51/2013, forordning (EU) nr. 691/2013, forordning (EU) nr. 709/2014, forordning (EU) 2017/771 og forordning (EU) 2020/1560).

§ 1 skal lyde:

EØS-avtalens vedlegg I kapittel II nr. 31o (forordning (EF) nr. 152/2009 som endret ved forordning (EU) nr. 278/2012, forordning (EU) nr. 51/2013, forordning (EU) nr. 691/2013, forordning (EU) nr. 709/2014, forordning (EU) 2017/771 og forordning (EU) 2020/1560) om metoder for prøvetakings- og analysemetoder ved offentlig kontroll av fôr gjelder som forskrift med de tilpasninger som følger av vedlegg I, protokoll 1 til avtalen og avtalen for øvrig.

II

Endringene trer i kraft straks.

Forordninger

Endringer som gjøres under avsnittet «Forordninger» under konsolidert forordning (EF) nr. 152/2009 i fôranalyseforskriften er:

Innledningsteksten til konsolidert forordning (EF) nr. 152/2009 skal lyde:

Nedenfor gjengis til informasjon norsk oversettelse av forordning (EF) nr. 152/2009. Dette er grunnrettsakten. Grunnrettsakten er endret ved forordning (EU) nr. 278/2012, forordning (EU) nr. 51/2013, forordning (EU) nr. 691/2013, forordning (EU) nr. 709/2014, forordning (EU) 2017/771 og forordning (EU) 2020/1560 med de endringer og tillegg som følger av EØS-tilpasningen av rettsakten i samsvar med vedlegg I og protokoll 1 til EØS-avtalen.

Forordning (EF) nr. 152/2009 er konsolidert til og med endringer gjennomført ved forordning (EU) nr. 278/2012, forordning (EU) nr. 51/2013, forordning (EU) nr. 691/2013, forordning (EU) nr. 709/2014, forordning (EU) 2017/771 og forordning (EU) 2020/1560.

I konsolideringsoversikten tilføyes følgende:

► M6 Forordning (EU) 2020/1560

I vedlegg VI skal det erstattes med følgende:

Tittelen på vedlegget skal lyde:

Punkt 1. til punkt 2.1. skal lyde:

► M2

I samsvar med bestemmelsene fastsatt i dette vedlegget skal bestemmelse av bestanddeler av animalsk opprinnelse i fôr utføres med lysmikroskopi eller polymerasekjedereaksjon (PCR).

Disse to metodene gjør det mulig å påvise forekomsten av bestanddeler av animalsk opprinnelse i fôrmidler og fôrblandinger. Med disse metodene er det imidlertid ikke mulig å beregne mengden slike bestanddeler i fôrmidler og fôrblandinger. Begge metodene har en påvisningsgrense på under 0,1 % vektprosent.

PCR-metoden gjør det mulig å identifisere den taksonomiske gruppen for de bestanddeler av animalsk opprinnelse som forekommer i fôrmidler og fôrblandinger.

Disse metodene skal anvendes når det kontrolleres at forbudene som er fastsatt i artikkel 7 nr. 1 i og vedlegg IV til forordning (EF) nr. 999/2001 og i artikkel 11 nr. 1 i forordning (EF) nr. 1069/2009, overholdes.

Avhengig av hvilken type fôr som skal prøves, kan disse metodene benyttes innenfor en enkelt protokoll, enten alene eller kombinert med hverandre, i samsvar med de standardiserte fremgangsmåtene (SOP) som er fastsatt av EU-referanselaboratoriet for animalske proteiner i fôrvarer (EURL-AP) og offentliggjort på laboratoriets nettsted 1 .

1 http://eurl.craw.eu/

2.1. Lysmikroskopi

◄ M2

Punkt 2.1.1. skal lyde:

► M6

Bestanddelene av animalsk opprinnelse som kan forekomme i fôrmidler og fôrblandinger som er sendt inn for analyse, identifiseres på grunnlag av typiske kjennetegn som kan identifiseres med mikroskop, som muskelfibrer og andre kjøttpartikler, brusk, bein, horn, hår, bust, blod, melkefettkuler, laktosekrystaller, fjær, eggeskall, fiskebein og fiskeskjell.

◄ M6

Punkt 2.1.2. til 2.1.2.1.3.1. skal lyde:

► M2

2.1.2. Reagenser og utstyr

2.1.2.1. Reagenser

2.1.2.1.1. Konsentreringsmiddel

2.1.2.1.1.1. Tetrakloretylen (spesifikk vekt 1,62)

2.1.2.1.2. Fargingsreagens

Alizaron-løsning (spe ut 2,5 ml 1M saltsyre med 100 ml vann og tilsett 200 mg alizaron til denne løsningen)

2.1.2.1.3. Monteringsmiddel

2.1.2.1.3.1. Lut (NaOH 2,5 % w/v eller KOH 2,5 % w/v)

◄ M2

Punkt 2.1.2.1.3.2. skal lyde:

► M6

2.1.2.1.3.2. Glyserol (ufortynnet, viskositet: 1490 cP) eller et monteringsmedium med tilsvarende egenskaper for tillaging av ikke-permanente objektglass

◄ M6

Punkt 2.1.2.1.3.3. til 2.1.2.2.1. skal lyde:

◄ M2

2.1.2.1.3.3. Norland ® Optical Adhesive 65 (viskositet: 1200 cP) eller harpiks med tilsvarende egenskaper for tillaging av permanente objektglass

2.1.2.1.4. Monteringsmiddel med fargingsegenskaper

Lugol-løsning (løs opp 2 g kaliumjodid i 100 ml vann og tilsett 1 g jod under hyppig risting)

Cystin-reagens (2 g blyacetat, 10 g NaOH/100 ml vann)

Fehlings væske (klargjort før bruk med like deler (1/1) av to stamløsninger A og B. Løsning A: løs opp 6,9 g kobber (II) sulfatpentahydrat i 100 ml vann. Løsning B: løs opp 34,6 g natriumkaliumtartrat-tetrahydrat og 12 g NaOH i 100 ml vann)

Tetrametylbenzidin/hydrogenperoksid. (løs opp 1 g 3,3’,5,5’ tetrametylbenzidin (TMB) i 100 ml iseddik og 150 ml vann. Bland fire deler av denne TMB-løsningen med én del 3 % hydrogenperoksid før bruk)

2.1.2.1.5. Skyllemidler

2.1.2.1.5.1. Etanol ≥96 % (teknisk kvalitet)

2.1.2.1.5.2. Aceton (teknisk kvalitet)

2.1.2.1.6. Blekemiddel

2.1.2.1.6.1. Ferdigkjøpt løsning av natriumhypokloritt (9–14 % aktivt klor)

2.1.2.2. Utstyr

2.1.2.2.1. Analysevekt med en nøyaktighet på 0,001 g

◄ M2

Punkt 2.1.2.2.2. til 2.1.2.2.3. skal lyde:

► M6

2.1.2.2.2. Malingsutstyr: kniv eller rotormølle. Dersom det brukes rotormølle, er det forbudt med sikter på ≤ 0,5 mm

2.1.2.2.3. Sikter med kvadratiske masker med maskevidde på 0,25 mm og 1 mm. Med unntak for sikting av prøver på forhånd bør siktenes diameter ikke overstige 10 cm for å unngå materialtap. Kalibrering av sikter kreves ikke.

◄ M6

Punkt 2.1.2.2.4. til 2.1.2.2.8. skal lyde:

► M2

Konisk skilletrakt av glass med et volum på 250 ml, utstyrt med en stoppekran av teflon eller slipt glass i bunnen av kjeglen. Stoppekranens åpning skal ha en diameter på ≥4 mm. Et bunnfallsglassbeger med konisk bunn kan også brukes, forutsatt at laboratoriet har vist at påvisningsnivåene tilsvarer de som oppnås ved bruk av den koniske skilletrakten av glass.

Skilletrakt

Stereomikroskop med en forstørrelsesgrad på minst 6,5× til 40×.

Sammensatt mikroskop med en forstørrelsesgrad på minst 100× to 400× og gjennomfallende lys. Polarisert lysmikroskopi og interferenskontrastmikroskopi kan også brukes.

Laboratorieglass av standardtype

Utstyr for tillaging av objektglass: Klassiske objektglass, objektglass med fordypning, dekkglass (20 × 20 mm), pinsett og liten spatel.

◄ M2

Punkt 2.1.2.2.9. til punkt 2.1.2.2.11. skal lyde:

► M6

Laboratorieovn

Sentrifuge

Filterpapir: kvalitativt cellulosefilter (porestørrelse 4-11 μm).

◄ M6

Punkt 2.1.3. skal lyde:

► M2

2.1.3. Prøvetaking og tillaging av prøver

◄ M2

Punkt 2.1.3.1. skal lyde:

► M6

Et representativt utvalg prøver, tatt i samsvar med bestemmelsene fastsatt i vedlegg I, skal brukes

◄ M6

Punkt 2.1.3.2. til 2.1.3.3. skal lyde:

► M2

For å unngå krysskontaminering på laboratoriet skal alt utstyr som skal brukes flere ganger, rengjøres grundig før bruk. Skilletrakten skal tas fra hverandre før rengjøring. Skilletraktens deler og glassvarer skal forvaskes for hånd og deretter vaskes i oppvaskmaskin. Sikter skal rengjøres med en børste med stiv, syntetisk bust. Det anbefales å rengjøre sikten en ekstra gang med aceton og trykkluft dersom den er brukt til fettholdig materiale som fiskemel.

2.1.3.3. Tillaging av andre prøver enn fett eller olje

◄ M2

Punkt 2.1.3.3.1. til 2.1.3.3.2. skal lyde:

► M6

Tørking av prøver: Prøver med et fuktighetsinnhold på > 14 % skal tørkes før håndtering i samsvar med vedlegg III til denne forordningen.

Forhåndssikting av prøver: For å samle informasjon om mulig miljøforurensning av fôret anbefales det å sikte (maskevidde 1 mm) fôrpelleter og kjerner på forhånd og deretter lage, analysere og rapportere om de to fraksjonene hver for seg, da de må anses som to ulike prøver.

◄ M6

Punkt 2.1.3.3.3. skal lyde:

► M2

Delprøvetaking og maling: Minst 50 g av prøven skal brukes som delprøver for analyser og deretter males opp.

◄ M2

Punkt 2.1.3.3.4 skal lyde:

► M2

Ekstraksjon og tillaging av bunnfallet: Et parti på 10 g (med en nøyaktighet på 0,01 g) av den forhåndsmalte delprøven overføres til skilletrakten eller bunnfallsglassbegeret med konisk bunn og 50 ml tetrakloretylen tilsettes. Dersom det dreier seg om fiskemel eller andre rene animalske produkter, mineralingredienser eller premikser som skaper mer enn 10 % bunnfall, skal partiet som overføres til trakten, ikke være på mer enn 3 g. Blandingen ristes kraftig i minst 30 sekunder, og innsiden av trakten skylles forsiktig med minst 50 ml tetrakloretylen for å fjerne eventuelle partikler som har festet seg. Den nye blandingen skal stå i minst 5 minutter før bunnfallet skilles ut ved å åpne stoppekranen.

Dersom det brukes et bunnfallsglassbeger med konisk bunn, skal det røres godt i blandingen i minst 15 sekunder, og eventuelle partikler som har festet seg på sidene i glassbegeret, skal skylles forsiktig av innsiden med minst 10 ml ren tetrakloretylen. Blandingen skal stå i 3 minutter før den røres i på nytt i 15 sekunder. Eventuelle partikler som har festet seg på innsiden av glassbegeret, skal skylles forsiktig av med minst 10 ml ren tetrakloretylen. Den nye blandingen skal stå i minst 5 minutter før den flytende fraksjonen fjernes og kasseres ved omhyggelig dekantering slik at ingenting av bunnfallet går tapt.

◄ M2

► M6

Sedimentet samles opp på et filterpapir plassert i en trakt for å kunne skille ut resterende tetrakloretylen og samtidig unngå fettavleiring i sedimentet. Sedimentet tørkes. Det anbefales å veie sedimentet etterpå (med en nøyaktighet på 0,001 g) for å kontrollere sedimenteringsfasen. Til slutt siktes sedimentet med en maskevidde på 0,25 mm og begge fraksjonene undersøkes, med mindre sikting vurderes som unødvendig.

◄ M6

Punkt 2.1.3.3.5. til 2.1.4.1. skal lyde:

► M2

Ekstraksjon og tillaging av det flytende materialet: Etter at bunnfallet er fremstilt med metoden beskrevet over, bør det finnes to faser i skilletrakten: en flytende som består av tetrakloretylen, og en fast fra det flytende materiale. Denne faste fasen er det flytende materialet, som fremstilles ved at stoppekranen åpnes og all tetrakloretylen helles ut av trakten. Skilletrakten snus på hodet, og det flytende materialet overføres til en stor petriskål og lufttørkes i et avtrekksskap. Dersom mer enn 5 % av det flytende materialet består av partikler på > 0,50 mm, skal det siktes (maskevidde 0,25 mm) og de to fraksjonene skal undersøkes.

Tillaging av råstoff: Et parti på minst 5 g av den forhåndsmalte delprøven skal tillages. Dersom mer enn 5 % av materialet består av partikler på > 0,50 mm, skal det siktes (maskevidde 0,25 mm) og de to fraksjonene skal undersøkes.

Dersom fettet er i fast form, skal det varmes opp i en ovn til det er flytende. 40 ml fett eller olje fra bunnen av prøven overføres med pipette til et sentrifugerør. Sentrifugeres i 10 minutter på 4000 omdreininger per minutt. Dersom fettet er i fast form etter sentrifugering, skal det varmes opp i en ovn til det er flytende. Gjenta sentrifugering i 5 minutter på 4000 omdreininger per minutt. Halvparten av de dekanterte urenhetene overføres med en liten skje eller en spatel til et objektglass for undersøkelse, glyserol anbefales som monteringsmiddel. De gjenværende urenhetene skal brukes til tillaging av bunnfallet som beskrevet i punkt 2.1.3.3.

For å gjøre det lettere å identifisere bestanddelene av animalsk opprinnelse kan fargingsreagens brukes under tillaging av prøven i samsvar med retningslinjene utstedt av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted.

Det tørkede bunnfallet overføres til et reagensglass og skylles to ganger med rundt 5 ml etanol (blandes begge gangene med et Vortex blandeapparat i 30 sekunder, la løsemiddelet stå i omtrent halvannet minutt før det helles ut). Bunnfallet blekes ved å tilsette minst 1 ml natriumhypoklorittløsning. La reaksjonen fortsette i 10 minutter. Reagensglasset fylles med vann, bunnfallet skal stå i 2–3 minutter, og vann og svevende partikler helles forsiktig ut. Bunnfallet skal skylles to ganger til med rundt 10 ml vann (blandesbegge gangene med et Vortex blandeapparat i 30 sekunder, la stå og hell ut vannet). Tillsett 2–10 dråper alizaron og bland løsningen med et Vortex blandeapparat. La reaksjonen pågå i 30 sekunder. Det fargede bunnfallet skylles først to ganger med omtrent 5 ml etanol og så én gang med aceton (blandes begge gangene med et Vortex blandeapparat i 30 sekunder, løsningen skal stå i omtrent 1 minutt og deretter helles ut). Det fargede bunnfallet tørkes.

2.1.4. Mikroskopisk undersøkelse

2.1.4.1. Tillaging av objektglass

◄ M2

Punkt 2.1.4.1. skal lyde:

► M6

Objektglass skal tillages av sedimentet og, avhengig av laboranten, av enten det flytende materialet eller råstoffet.◄ M6 ► M2 Dersom sikting er brukt ved tillaging av prøvene, skal begge fraksjonene (både den fine og den grove) tillages. Analyseprøver fra fraksjonene som fordeles på objektglassene, skal være representative for hele fraksjonen.

For å sikre at en komplett undersøkelsesprotokoll som fastsatt i 2.1.4.2 kan gjennomføres, skal det tillages et tilstrekkelig antall objektglass.

Objektglassene skal monteres med egnet monteringsmiddel i samsvar med de standardiserte framgangsmåtene (SOP) fastsatt av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted. Objektglassene skal være dekket av dekkglass.

◄ M2

Punkt 2.1.4.2. skal lyde:

► M6

De tillagede objektglassene skal undersøkes i samsvar med undersøkelsesflytskjemaene fastsatt i diagram 1 og 2.

Mikroskopundersøkelsene skal gjennomføres ved at det sammensatte mikroskopet brukes på sedimentet og, avhengig av laboranten, enten på det flytende materialet eller på råstoffet. For de grove fraksjonene kan også stereomikroskop brukes i tillegg til det sammensatte mikroskopet. Hvert objektglass skal undersøkes i sin helhet med ulike grader av forstørring. Nøyaktig beskrivelse av hvordan flytskjemaene skal brukes, er angitt i en standardisert framgangsmåte (SOP) som er fastsatt av EU-referanselaboratoriet for animalske proteiner i fôrvarer (EURL-AP) og offentliggjort på laboratoriets nettsted.

Det minste antallet av objektglass som skal undersøkes ved hvert trinn av undersøkelsesflytskjemaene, skal alltid overholdes, med mindre den samlede mengden av fraksjonsmateriale ikke gjør det mulig å nå det fastsatte antallet objektglass, for eksempel når det ikke er utfelt noe sediment. Det skal ikke undersøkes flere enn seks objektglass per bestemmelse for å registrere antallet partikler.

Dersom det tillages ytterligere objektglass av det flytende materialet eller råstoffet ved bruk av et mer spesifikt monteringsmedium med fargende egenskaper, i samsvar med nr. 2.1.2.1.4, for ytterligere karakterisering av strukturer (f.eks. partikler fra fjær, hår, muskelfibrer eller blod) som er påvist på objektglass som er tillaget med andre monteringsmedier, i samsvar med nr. 2.1.2.1.3, skal antallet partikler telles på grunnlag av høyst seks objektglass per bestemmelse, medregnet de ytterligere objektglassene med et mer spesifikt monteringsmedium.

For å gjøre det enklere å identifisere partiklenes art og opprinnelse kan laboranten bruke hjelpemidler som systemer for beslutningsstøtte, bildesamlinger og referanseprøver.

Diagram 1 Undersøkelsesflytskjema for påvisning av animalske partikler i fôrblandinger og fôrmidler for den første bestemmelsen (D1 og D2 henviser til første og andre bestemmelse. *: landvirveldyr, fisk)

Diagram 2 Undersøkelsesflytskjema for påvisning av animalske partikler i fôrblandinger og fôrmidler for den andre bestemmelsen (D1 og D2 henviser til første og andre bestemmelse. *: landvirveldyr, fisk)

◄ M6

Punkt. 2.1.4.3. skal lyde:

► M6

Bestemmelsene skal utføres på ulike delprøver på 50 g hver.

Dersom det ikke påvises animalske partikler etter en første bestemmelse utført i samsvar med undersøkelsesflytskjemaet fastsatt i diagram 1, er det ikke nødvendig med en ytterligere bestemmelse, og analyseresultatet skal rapporteres med bruk av ordlyden fastsatt i nr. 2.1.5.1.

Dersom det påvises en eller flere animalske partikler av en bestemt type (dvs. landvirveldyr eller fisk) etter den første bestemmelsen utført i samsvar med undersøkelsesflytskjemaet fastsatt i diagram 1, og typen partikler bekrefter prøvens angitte innhold, er det ikke nødvendig med en andre bestemmelse. Dersom summen av påviste animalske partikler av en bestemt art er over 5 etter den første bestemmelsen, skal resultatet av analysen rapporteres per dyreart med bruk av ordlyden fastsatt i nr. 2.1.5.3. Ellers rapporteres resultatet av analysen per dyretype med bruk av ordlyden fastsatt i nr. 2.1.5.2.

I andre tilfeller, også når det ikke er angitt noe innhold til laboratoriet, skal det utføres en andre bestemmelse ut fra en ny delprøve.

Dersom summen av påviste animalske partikler av en bestemt type er over ti etter den andre bestemmelsen utført i samsvar med undersøkelsesflytskjemaet fastsatt i diagram 2, skal resultatet av analysen rapporteres per dyretype med bruk av ordlyden fastsatt i nr. 2.1.5.3. Ellers rapporteres resultatet av analysen per dyretype med bruk av ordlyden fastsatt i nr. 2.1.5.2.

◄ M6

Punkt 2.1.5. skal lyde:

► M6

Når resultatene rapporteres, skal laboratoriet oppgi hvilken type materiale analysen er utført på (sediment, flytende materiale eller råstoff). Rapporten skal tydelig angi hvor mange bestemmelser som er gjennomført, og om fraksjonene er siktet før tillagingen av objektglass, jf. siste ledd i nr. 2.1.3.3.4.

Laboratorierapporten skal minst inneholde opplysninger om forekomsten av bestanddeler som stammer fra landvirveldyr og fisk.

De ulike tilfellene skal rapporteres på følgende måte:

I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven ikke påvist partikler som stammer fra landvirveldyr. I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven ikke påvist partikler som stammer fra fisk.

Påvisning av 1–5 animalske partikler av en bestemt type når det ble utført bare en bestemmelse, eller 1–10 partikler av en bestemt type ved to bestemmelser (antallet påviste partikler er under den beslutningsgrensen som er fastsatt i den standardiserte framgangsmåten til EU-referanselaboratoriet for animalske proteiner i fôrvarer og offentliggjort på laboratoriets nettsted 2 :

I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven ikke påvist flere enn fem partikler som stammer fra landvirveldyr. Partiklene ble identifisert som ... [bein, brusk, muskelvev, hår, horn ...]. Denne lave forekomsten er under beslutningsgrensen for denne mikroskopimetoden. I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven ikke påvist flere enn fem partikler som stammer fra fisk. Partiklene ble identifisert som ... [fiskebein, fiskeskjell, brusk, muskelvev, otolitter, gjeller ...]. Antall påviste partikler er under beslutningsgrensen for denne mikroskopimetoden.

I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i de to bestemmelsene av den innsendte prøven ikke påvist flere enn ti partikler som stammer fra landvirveldyr. Partiklene ble identifisert som ... [bein, brusk, muskelvev, hår, horn ...]. Denne lave forekomsten er under beslutningsgrensen for denne mikroskopimetoden. I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i de to bestemmelsene av den innsendte prøven ikke påvist flere enn ti partikler som stammer fra fisk. Partiklene ble identifisert som ... [fiskebein, fiskeskjell, brusk, muskelvev, otolitter, gjeller ...]. Denne lave forekomsten er under beslutningsgrensen for denne mikroskopimetoden.

Dersom prøven er siktet på forhånd, skal laboratorierapporten angi hvilken fraksjon (siktet fraksjon, pelletert fraksjon eller kjerner) de animalske partiklene er påvist i, ettersom påvisning av animalske partikler i bare den siktede fraksjonen kan være et tegn på forurensning fra omgivelsene. Dersom det bare påvises animalske partikler som verken kan kategoriseres som landvirveldyr eller fisk (f.eks. muskelfibrer), skal rapporten angi at det bare ble påvist slike animalske partikler, og at det ikke kan utelukkes at de stammer fra landvirveldyr.

Påvisning av flere enn fem animalske partikler av en bestemt type når det ble utført bare en bestemmelse, eller påvisning av flere enn ti partikler av en bestemt type ved to bestemmelser:

I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven påvist flere enn fem partikler som stammer fra landvirveldyr. Partiklene ble identifisert som ... [bein, brusk, muskelvev, hår, horn ...]. I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i den innsendte prøven påvist flere enn fem partikler som stammer fra fisk. Partiklene ble identifisert som ... [fiskebein, fiskeskjell, brusk, muskelvev, otolitter, gjeller ...].

I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i de to bestemmelsene av den innsendte prøven påvist flere enn ti partikler som stammer fra landvirveldyr. Partiklene ble identifisert som ... [bein, brusk, muskelvev, hår, horn ...]. I den grad det har vært mulig å fastslå ved bruk av lysmikroskop, ble det i de to bestemmelsene av den innsendte prøven påvist flere enn ti partikler som stammer fra fisk. Partiklene ble identifisert som ... [fiskeben, fiskeskjell, brusk, muskelvev, otolitter, gjeller ...].

Dersom prøven er siktet på forhånd, skal laboratorierapporten angi hvilken fraksjon (siktet fraksjon, pelle-tert fraksjon eller kjerner) de animalske partiklene er påvist i, ettersom påvisning av animalske partikler i bare den siktede fraksjonen kan være et tegn på forurensning fra omgivelsene. Dersom det bare påvises animalske partikler som verken kan kategoriseres som landvirveldyr eller fisk (f.eks. muskelfibrer), skal rapporten angi at det bare ble påvist slike animalske partikler, og at det ikke kan utelukkes at de stammer fra landvirveldyr.

2 http://eurl.craw.eu/

◄ M6

Punkt 2.2. skal lyde:

► M2

2.2. PCR

Deoksyribonukleinsyre-fragment (DNA-fragment) av animalsk opprinnelse som kan forekomme i fôrmidler og fôrblandinger påvises ved en genetisk amplifikasjonsteknikk ved PCR som er rettet mot artsspesifikke DNA-sekvenser.

PCR-metoden krever at det først foretas en DNA-ekstraksjon. Deretter amplifiseres DNA-ekstraktet for å påvise de dyreartene som prøven omfattet.

2.2.2. Reagenser og utstyr

2.2.2.1. Reagenser

Bare reagenser som er godkjent av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted, skal brukes.

2.2.2.1.2. Reagenser for genetisk amplifisering

Det skal bare brukes primere og sonder med oligonukleotidsekvenser som er godkjent av EURL-AP( ).

Bare Master Mix-løsninger som ikke inneholder reagenser som kan føre til feil resultat på grunn av forekomst av animalsk DNA, skal brukes ( ).

2.2.2.1.2.3. Dekontaminerings-reagenser

2.2.2.1.2.3.1. Saltsyreløsning (0,1 N)

2.2.2.1.2.3.2. Blekemiddel (løsning av natriumhypokloritt med 0,15 % aktivt klor)

2.2.2.1.2.3.3. Ikke-etsende reagenser for dekontaminering av kostbare enheter som analysevekter (f.eks. DNA EraseTM fra MP Biomedicals)

2.2.2.2. Utstyr

2.2.2.2.1. Analysevekt med en nøyaktighet på 0,001 g

2.2.2.2.2. Malingsutstyr

2.2.2.2.3. Termosykler for sanntids PCR

2.2.2.2.4. Mikrosentrifuge for mikrosentrifugerør

2.2.2.2.5. Sett med mikropipetter som gjør det mulig å overføre fra 1 μl opptil 1000 μl med pipette

Molekylærbiologisk standardutstyr i plast: mikrosentrifugerør, pipettespisser med filter til mikropipetter og plater som passer til termosykleren.

Frysere til lagring av prøver og reagenser

2.2.3. Prøvetaking og tillaging av prøver

Et representativt utvalg prøver, tatt i samsvar med bestemmelsene fastsatt i vedlegg I, skal anvendes.

Tillaging av laboratorieprøvene fram til DNA-ekstraksjon skal oppfylle kravene fastsatt i vedlegg II. Minst 50 g av prøven skal brukes som delprøver for analyser og deretter males opp.

Tillaging av prøven skal skje i et annet rom enn det som brukes til DNA-ekstraksjon og til genetiske amplifikasjonsreaksjoner som beskrevet i ISO 24276.

Det skal tillages to analyseprøver på minst 100 mg hver.

DNA-ekstraksjonen skal gjennomføres på hver tillagede analyseprøve i samsvar med de standardiserte framgangsmåtene (SOP) som er fastsatt av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted.

en blindprøve for ekstraksjon, en positiv kontroll for DNA-ekstraksjon.

Genetisk amplifisering skal gjennomføres ved hjelp av metodene som er godkjent for hver art som må identifiseres. Disse metodene er nedfelt i de standardiserte framgangsmåtene som er fastsatt av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted. Hvert DNA-ekstrakt skal analyseres ved minst to ulike konsentrasjoner for å vurdere hemming.

en positiv kontroll for mål-DNA skal brukes for hver plate eller serie av PCR-undersøkelse, en reagenskontroll for amplifiseringen (også kalt NTC for «no template control») skal brukes for hver plate eller serie av PCR-undersøkelser.

Når resultatene rapporteres, skal laboratoriet minst oppgi vekten på de analyseprøvene som er brukt, hvilke ekstraksjonsteknikker som er brukt, antall bestemmelser som er gjennomført og metodens påvisningsgrense.

Resultatene skal ikke tolkes og rapporteres dersom den positive DNA-ekstraksjonskontrollen og de positive DNA-målkontrollene ikke gir positive resultater for målet for undersøkelsen samtidig som reagenskontrollen for amplifiseringen er negativ.

Dersom resultatene fra de to analyseprøvene ikke stemmer overens, skal minst den genetiske amplifiseringen gjøres på nytt. Dersom laboratoriet har mistanke om at DNA-ekstraksjonen kan være årsaken til uoverensstemmelsen, skal en ny DNA-ekstraksjon og en påfølgende genetisk amplifisering gjennomføres før resultatene tolkes.

Den endelige framleggingen av resultatene skal bygge på integrering og tolking av resultatene fra de to analyseprøvene i samsvar med de standardiserte framgangsmåtene som er fastsatt av EURL-AP og offentliggjort på laboratoriets nettsted.

Et negativt resultat skal rapporteres som følger:

Det ble ikke påvist DNA fra X i den innsendte prøven (der X er dyreart eller gruppen av dyrearter som er målet for forsøket).

Et positivt resultat skal rapporteres som følger:

Det ble påvist DNA fra X i den innsendte prøven (der X er dyreart eller gruppen av dyrearter som er målet for forsøket).

◄ M2